- 马堃;刘晓倩;李佳妮;
采用转录组学探究补肾促卵冲剂治疗高泌乳素血症导致不孕的作用机制，并进行动物实验验证。建立高泌乳素血症导致不孕症的小鼠模型后分组：正常组，模型组，补肾促卵冲剂高、中、低剂量组，溴隐亭组，观察动情周期，性腺指数，血清性激素，卵巢、乳腺组织形态，卵泡计数及生育力。结果显示，补肾促卵冲剂可有效恢复小鼠动情周期，下调泌乳素(prolactin, PRL)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone, FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH),上调雌二醇(estradiol, E_2)水平，有效增加始基卵泡及窦状卵泡数量，提高排卵率及生育力。通过RNA测序结合GO功能和KEGG通路富集分析，补肾促卵冲剂可能通过cAMP-PKA、Kiss-1/GPR54、Hippo等信号通路调节卵巢、垂体等细胞中脂质与抗氧化酶的代谢，发挥治疗作用。动物实验结果表明，补肾促卵冲剂能上调血清多巴胺(DA)水平和垂体DRD2表达，下调下丘脑与卵巢cAMP水平，及垂体、卵巢PKA、CREB、p-CREB蛋白表达，通过调节cAMP-PKA信号通路达到治疗高泌乳素血症导致不孕的作用。
2024年08期 v.49 1996-2005页 [查看摘要][在线阅读][下载 4029K] [引用频次：4 ] |[下载次数：483 ] - 马堃;李佳妮;宫林娟;张涵;
临床观察补肾促卵冲剂治疗多囊卵巢综合征(PCOS)导致不孕症的有效性及安全性，并运用代谢组学探讨其作用机制。选取94例肾虚血瘀型PCOS不孕患者，试验组和对照组各47例。观测基础体温(BBT),B超监测卵泡、卵巢体积、子宫内膜及排卵和妊娠情况，血清性激素水平[促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、催乳素(PRL)、雌二醇(E_2)、孕酮(P)、睾酮(T)、游离睾酮(FT)、雄烯二酮(A2)、抑制素B(INHB)、抗缪勒管激素(AMH)],凝血功能，中医证候积分，血常规，尿常规，肝、肾功能等，并运用代谢组学对26例患者(试验组与对照组各13例)血清代谢物进行比较。结果显示，试验组总有效率和妊娠率明显高于对照组(P<0.001),提示补肾促卵冲剂能明显调节性激素和卵巢功能，可显著降低LH、T、FT、A2及INHB水平(P<0.05或P<0.01)和LH/FSH比值(P<0.05),提高P水平(P<0.05),促进排卵，增加内膜厚度，改善中医证候积分，无不良反应。代谢组学共筛选出24个差异代谢物，且肾虚血瘀型PCOS不孕患者的性激素与差异代谢物之间存在相关性。结果表明，补肾促卵冲剂可能通过脂质、氨基酸代谢等途径调节激素水平。
2024年08期 v.49 2006-2015页 [查看摘要][在线阅读][下载 1474K] [引用频次：9 ] |[下载次数：1097 ] - 马堃;李佳妮;刘晓倩;
研究补肾促卵冲剂治疗高泌乳素血症导致不孕症的治疗作用及安全性。选择60例肾虚血瘀型高泌乳素血症导致不孕症患者，分为试验组(补肾促卵冲剂+甲磺酸溴隐亭片安慰剂)和对照组(甲磺酸溴隐亭片+补肾促卵冲剂安慰剂),观察排卵率、妊娠率、血清性激素、基础体温(BBT)及中医证候积分。结果显示，试验组临床有效率90.00%,对照组临床有效率80.00%;试验组能够显著降低泌乳素(PRL)水平、增加妊娠率，在增加BBT双相比例、改善中医证候积分、提高排卵率方面优于对照组。结果表明，补肾促卵冲剂治疗高泌乳素血症导致排卵障碍性不孕症疗效确切，安全可靠。
2024年08期 v.49 2016-2022页 [查看摘要][在线阅读][下载 1108K] [引用频次：6 ] |[下载次数：542 ] - 马堃;黄天娇;曹仁爽;李芊;
运用网状Meta分析对不同中成药联合抗生素治疗盆腔炎性疾病(PID)的疗效和安全性进行评价。检索中国知网(CNKI)、万方(Wanfang)、维普(VIP)、中国生物医学文献服务系统(SinoMed)、PubMed、Cochrane Library、EMbase、Web of Science数据库，搜索建库至2023年7月16日收录的中成药联合抗生素治疗PID的随机对照试验(RCT)。运用Cochrane风险偏倚工具对纳入文献进行质量评价，采用RevMan 5.4、Stata 16软件进行数据分析。最终纳入46篇RCTs,包含康妇消炎栓、妇科千金片/胶囊、康妇炎胶囊、妇炎消胶囊、花红片/胶囊、妇炎舒胶囊、妇乐片、金刚藤胶囊、妇炎康复胶囊。网状Meta分析显示，(1)临床有效率方面，排名第1的干预措施为康妇消炎栓+抗生素；(2)降低超敏C反应蛋白(hs-CRP)方面，排名第1的干预措施为花红片/胶囊+抗生素；(3)降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)方面，排名第1的干预措施为妇乐片+抗生素；(4)降低复发率方面，排名第1的干预措施为妇炎舒胶囊+抗生素；(5)安全性方面，不良反应最少的干预措施为康妇炎胶囊+抗生素。结果表明，中成药联合抗生素治疗PID能够提高综合疗效，降低患者hs-CRP和TNF-α,且复发率低，疗效安全可靠。临床治疗时，可优先选择康妇消炎栓或康妇炎胶囊联合抗生素。由于纳入文献样本量与文献质量等限制，结论有待更多大样本、高质量的研究加以验证。
2024年08期 v.49 2023-2036页 [查看摘要][在线阅读][下载 2687K] [引用频次：2 ] |[下载次数：1244 ] - 马堃;李佳妮;钟观兰;张涵;马林纳;孙立华;
子宫肌瘤是影响育龄期女性不孕的常见因素，通过整理马堃教授临床诊治子宫肌瘤所致不孕症的案例，探讨其治疗子宫肌瘤导致不孕症的理论依据及组方原则。肾藏精，主生殖，肾虚是导致不孕症的基本病机，无论是肾气、肾精不足或肾阴阳失调均可导致气血运行不畅，久滞成瘀，而血瘀是贯穿始终的重要因素，女子以血为用，气血之根在于肾，故马堃教授认为肾虚血瘀是子宫肌瘤所致不孕症的关键病机。马堃教授以补肾活血法为原则治疗子宫肌瘤所致不孕，根据月经周期气血变化规律和卵泡生长过程，辨证施治，行经期胞宫正开，正值经血下泄之时，以滋肾阴活血为主促进卵泡发育；经后期在此基础上化瘀消癥散结，攻补并行；经间期重阴则阳时，则以补肾活血为法，促进阴阳转化，卵子得以顺利排出；经前期以温肾阳为主，促进孕卵着床，兼以疏肝理气，行气消滞，补中有行，随症加减，临床效果显著，供广大同仁参考。
2024年08期 v.49 2037-2041页 [查看摘要][在线阅读][下载 1019K] [引用频次：1 ] |[下载次数：465 ] - 张会仙;马堃;田彩蝶;孙立华;
子宫发育不良是子宫发育异常中一种常见类型，可导致不孕症。中医药治疗该病具有独特优势，该文主要介绍马堃教授应用补肾活血法治疗子宫发育不良所致不孕的验案，探讨其治疗子宫发育不良导致不孕的理论依据与组方原则。肾藏精，主生殖，肾虚是该病的发病基础，肾气不足、肾阴亏虚、肾阳不足均可导致气血运行不畅，久滞成瘀；瘀阻胞络，化精乏源又加重肾虚；两者相互影响，甚则形成肾虚-血瘀-肾虚的恶性循环，最终胞宫失于濡养，造成子宫发育不良，难以孕育，故马堃教授认为肾虚血瘀是子宫发育不良所致不孕的关键病机。在治疗上，主张以补肾活血为根本治疗原则，肾中精气充盛，瘀血去，新血生，阴阳气血调和，通达冲任，濡养胞宫，胞宫生理功能正常，方能有子；亦重视以益气养血为辅，调经种子并行，养气血与补肾精同用，顺应月经周期变化，以使肾中精气旺盛、气血充沛，滋养胞宫血络，促进子宫的发育及卵泡的成熟排出；亦注意中西医结合，标本兼治。马堃教授治疗该病临床疗效显著，供广大同仁参考。
2024年08期 v.49 2042-2046页 [查看摘要][在线阅读][下载 1015K] [引用频次：5 ] |[下载次数：391 ]
- 宋亚静;李丹丹;吕竞芳;蒋敏;杜惠兰;
探究寿胎丸治疗先兆流产的作用机制。按照随机数字表法将ICR雌性小鼠随机分为4组，分别为正常组、模型组、寿胎丸组和地屈孕酮组，每组15只。每日9:00正常组和模型组灌胃生理盐水，寿胎丸组灌胃寿胎丸混悬液，地屈孕酮组灌胃地屈孕酮溶解剂，每日16:00正常组用等体积蒸馏水灌胃，模型组、寿胎丸组、地屈孕酮组灌胃氢化可的松溶液，连续4 d。将动情前期或动情期的ICR雌鼠与雄鼠按2∶1合笼。自妊娠第1天，按照之前给药方式继续给药，连续给药5 d。第6天灌胃米非司酮，复制肾虚流产模型。各组在妊娠第6天时随机选择10只ICR雌性小鼠，取连胎子宫，HE染色观察母胎界面滋养细胞病理形态学改变；Western blot及免疫荧光法检测糖酵解的关键酶己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、烯醇化酶1(enolase 1,ENO1)、丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)以及乳酸脱氢酶A(lactate dehydrogenase A,LDHA)的蛋白表达，Western blot及实时荧光定量PCR法检测胚胎组织凋亡相关因子caspase-3、Bax、Bcl-2的表达，TUNEL法检测滋养细胞凋亡；剩余5只雌鼠孕14 d时采用台盼蓝染法计算胚胎丢失率。妊娠第14天时，正常组胚胎丢失率为5.00%,模型组与正常组相比胚胎丢失率升高，为27.78%(P<0.05);与模型组相比，地屈孕酮组及寿胎丸组胚胎丢失率降低，分别为10.26%、7.50%。妊娠第6天时，与正常组相比，模型组糖酵解的关键蛋白HK2、ENO1、PKM2、LDHA表达显著降低(P<0.05),凋亡相关因子Bcl-2表达显著降低(P<0.05),caspase-3、Bax表达显著升高(P<0.05);与模型组相比，地屈孕酮组及寿胎丸组HK2、ENO1、PKM2、LDHA蛋白表达均显著升高(P<0.05),凋亡因子Bcl-2表达显著升高(P<0.05),caspase-3、Bax表达显著降低(P<0.05)。TUNEL染色显示，与正常组相比，模型组细胞凋亡率显著升高(P<0.05);与模型组相比，地屈孕酮组及寿胎丸组滋养细胞凋亡率显著降低(P<0.05)。综上，寿胎丸能降低胚胎丢失率，发挥保胎作用，其机制可能是通过提高先兆流产模型小鼠母胎界面有氧糖酵解水平，抑制滋养细胞凋亡实现的。
2024年08期 v.49 2169-2177页 [查看摘要][在线阅读][下载 3663K] [引用频次：2 ] |[下载次数：1063 ] - 罗政;李定祥;蔡昱哲;刘艺璇;阳晶晶;吴琴;张亚男;陈静;邓奕辉;
旨在探讨《古今录验》续命汤对急性脑梗死大鼠脑缺血性损伤及血管新生的影响。以SD大鼠为研究对象，随机分为6组：假手术组，模型组，续命汤低、中、高剂量组，丁苯酞组。大鼠大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型成功建立后，各组大鼠每天分别灌胃给予蒸馏水，续命汤5.13、10.26、20.52 g·kg~(-1)药液、丁苯酞混悬液(0.06 g·kg~(-1))。连续干预7 d后，进行末次神经功能评分，处死所有大鼠，采集脑组织样本。通过神经功能评分和2,3,5-氯化三苯基四氮染色评估脑缺血损伤程度；苏木素-伊红染色观察脑组织病理学形态改变；透射电子显微镜观察缺血半暗区皮层脑组织神经元和微血管内皮细胞(endothelial cells, ECs)超微结构；免疫荧光检测缺血半暗区皮层脑组织血管性血友病因子(von Willebrand factor, vWF)和造血祖细胞抗原CD34(hematopoietic progenitor cell antigen CD34, CD34)的蛋白表达情况；实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测缺血半暗区皮层脑组织Runt相关转录因子1(Runt-related transcription factor 1, RUNX1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、血管生成素-1(angiopoietin-1, Ang-1)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)、VEGF受体2(VEGF receptor 2, VEGFR2)mRNA和蛋白的表达情况。结果表明，与假手术组相比，模型组大鼠神经功能评分、脑梗死面积显著升高(P<0.01);缺血半暗区皮层脑组织病理学形态结构、神经元与微血管ECs超微结构受损；RUNX1、VEGF、Ang-1、Ang-2、VEGFR2 mRNA表达均显著升高(P<0.01);vWF、CD34、RUNX1、VEGF、Ang-1、Ang-2、VEGFR2蛋白表达均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组相比，续命汤高剂量组、丁苯酞组神经功能缺损评分和脑梗死面积显著降低(P<0.01);缺血半暗区皮层脑组织病理学形态结构、神经元与微血管ECs超微结构损伤情况得到改善；RUNX1、VEGF、Ang-1、Ang-2、VEGFR2 mRNA表达显著升高(P<0.01);vWF、CD34、RUNX1、VEGF、Ang-1、Ang-2、VEGFR2蛋白表达也显著升高(P<0.01)。上述结果表明，《古今录验》续命汤可以促进MCAO大鼠缺血半暗区皮层脑组织的血管新生，加快侧支循环的建立，以减轻神经功能障碍，可能与RUNX1/VEGF途径有关。
2024年08期 v.49 2178-2187页 [查看摘要][在线阅读][下载 4057K] [引用频次：3 ] |[下载次数：475 ] - 冷昌龙;林款;周梅;叶贤胜;舒细记;柳威;
基于糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)/酪氨酸激酶1(janus activated kinase 1,JAK1)/信号转导和转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路探讨红景天苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)小鼠肾损伤的保护作用。采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)建立小鼠DN模型，随机分为正常组、模型组、红景天苷低剂量(20 mg·kg~(-1))组、红景天苷高剂量(100 mg·kg~(-1))组、二甲双胍(140 mg·kg~(-1))组，每组12只。造模成功后每日灌胃相应药物或溶剂1次，持续10周，每2周测定体质量、日饮水量，检测空腹血糖(fasting blood glucose, FBG)。末次给药结束后，进行口服糖耐量测试，收集24 h尿液、血清及肾组织样本。采用生化法检测24 h尿蛋白(24 hours urinary total protein, 24 h-UTP),血清肌酐(serum creatinine, Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)、甘油三酯(triglyceride, TG)、总胆固醇(total cholesterol, TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol, LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)水平；过碘酸雪夫(periodic acid-Schiff, PAS)染色观察肾组织病理形态变化；免疫组织化学染色检测肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、糖基化终末产物(advanced glycation end products, AGEs)表达；试剂盒检测肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)活力以及丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平；酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清AGEs、羧乙基赖氨酸(carboxyethyllysine, CEL)、羧甲基赖氨酸(carboxymethyllysine, CML)水平；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织RAGE蛋白表达以及JAK1、STAT3蛋白的磷酸化水平。结果显示，与正常组比较，模型组小鼠FBG,血糖曲线下面积(area under the curve of glucose, AUCG),饮水量，肾脏指数，24 h-UTP,肾小管损伤评分，肾小球细胞外基质占比，血清中Scr、BUN、TG、LDL-C、AGEs、CEL、CML水平，肾组织中MDA含量，α-SMA、vimentin、AGEs、RAGE蛋白表达及JAK1、STAT3蛋白的磷酸化水平显著增加(P<0.01);血清HDL-C水平，肾组织SOD、CAT、GSH-PX活力显著降低(P<0.01)。与模型组比较，红景天苷高剂量组小鼠上述指标变化均显著逆转(P<0.05或P<0.01)。该研究表明，红景天苷可通过抑制AGEs介导的RAGE/JAK1/STAT3信号轴活性减轻氧化应激反应和肾脏纤维化，发挥治疗DN的作用。
2024年08期 v.49 2188-2196页 [查看摘要][在线阅读][下载 2400K] [引用频次：13 ] |[下载次数：1582 ] - 梁桓;李香妤;张雄伟;包懿文;丁美灵;袁强华;何成诗;曾南;
依据感咳颗粒在大鼠体内的入血成分研究基础，结合网络药理学、分子对接和动物实验验证探究感咳颗粒干预急性肺损伤(acute lung injury, ALI)的潜在作用机制。将感咳颗粒的大鼠入血成分导入SwissTargetPrediction平台预测药物靶点，从疾病数据库收集ALI相关靶点，取交集并构建蛋白-蛋白互作(protein-protein interaction, PPI)网络筛选核心靶点，随后进行基因本体(Gene Ontology, GO)功能和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Gnomes, KEGG)通路富集分析。构建“入血成分-靶点-通路-疾病”网络，根据其拓扑参数筛选感咳颗粒干预疾病的核心成分。借助分子对接预测核心成分与关键靶点的结合能力。通过脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的ALI小鼠模型验证感咳颗粒干预急性肺损伤的关键靶点。PPI拓扑参数分析得到与ALI有关的STAT3、SRC、HSP90AA1、MAPK3、HRAS、MAPK1前6个关键靶点。GO功能分析可知主要与ERK1和ERK2级联、炎症反应、对脂多糖反应等有关；KEGG分析结果显示，主要富集通路显示为MAPK、中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trap, NET)形成等。根据“入血成分-靶点-通路-疾病”网络拓扑参数分析筛选出前6个核心成分(五味子酯乙、五味子醇甲、五味子醇乙、哈巴俄苷、异鸢尾黄素、颈花胺)。分子对接结果显示6个核心成分和该颗粒含量最高的射干苷与MAPK3、SRC、MAPK1、STAT3关键靶点具有较高的亲和力。体内实验结果表明，与模型组相比，感咳颗粒能有效缓解LPS诱导的小鼠肺组织病理损伤，抑制炎性浸润，降低支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)中总蛋白含量、一氧化氮(nitric oxide, NO)与髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)水平，以及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素γ(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素(interleukin, IL)-1β、IL-6、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)以及趋化因子(C-X-C基序)配体1[chemokine (C-X-C motif) ligand 1,CXCL1]含量，显著下调肺组织中淋巴细胞抗原6G(lymphocyte antigen 6G,Ly6G)、瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated histones 3,Cit-H3)表达水平及SRC、ERK1/2、STAT3磷酸化蛋白表达水平。综上，感咳颗粒可有效抑制LPS诱导的急性肺损伤炎症反应，保护肺组织，调节炎性因子释放，抑制中性粒细胞浸润及NET形成，作用机制可能与抑制SRC/ERK1/2/STAT3信号通路激活有关。
2024年08期 v.49 2197-2209页 [查看摘要][在线阅读][下载 2977K] [引用频次：5 ] |[下载次数：1983 ] - 段玲婧;庄倩;陈立;曾悦;刘星雨;王璐璐;熊玉霞;
该研究以脂多糖(LPS)+三磷酸腺苷(ATP)刺激的J774A.1巨噬细胞建立细胞焦亡体外模型，探讨大黄游离蒽醌(free total rhubarb anthraquinones, FTRAs)对细胞焦亡的干预机制。体外培养J774A.1巨噬细胞，实验分组为空白对照组、不同质量浓度脂多糖(LPS,0.25、0.5、1μg·mL~(-1))+ATP(1.25、2.5、5 mmol·L~(-1))组，通过CCK-8法检测细胞活力、碘化丙锭(PI)凋亡细胞染色法、乳酸脱氢酶(LDH)及白细胞介素(IL)-18和肿瘤坏死因子(TNF)-α释放，建立巨噬细胞焦亡体外模型。之后将J774A.1巨噬细胞随机分为6组：空白对照组，LPS+ATP组，FTRAs高剂量单独作用组，FTRAs低、中、高剂量预保护组。检测上述细胞焦亡的表型特征和关键指标作为评判FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡的影响依据。Western blot法和RT-PCR法检测半胱氨酸蛋白酶(caspase)-1/11细胞焦亡通路相关蛋白和mRNA表达水平，阐明其抗焦亡效应的分子机制。结果显示巨噬细胞焦亡体外模型以0.50μg·mL~(-1) LPS+5.00 mmol·L~(-1) ATP的刺激条件效果最佳。FTRAs预保护细胞24 h,能够提高焦亡条件下细胞的活力、减轻细胞的受损程度、降低PI染色阳性率并减少LDH、IL-18和TNF-α的释放。FTRAs能够明显抑制GSDMD蛋白的活化，并且显著下调焦亡通路特征分子TLR4、NLRP3、cleaved-caspase-1、cleaved-caspase-11的蛋白表达，但是对ASC蛋白无明显影响。FTRAs还能够明显抑制caspase-1、caspase-11和GSDMD的mRNA表达。这些研究结果表明，FTRAs对LPS+ATP诱导的细胞焦亡模型具有抑制作用，且FTRAs通过调控经典和非经典细胞焦亡信号通路，减少炎性炎症因子的产生，发挥抗焦亡效应。
2024年08期 v.49 2210-2221页 [查看摘要][在线阅读][下载 3138K] [引用频次：4 ] |[下载次数：735 ] - 曾蕊;王晓萱;崔羲和;杨庆;朱晓新;王娅杰;
该研究将探讨瑞香狼毒提取物(SCL)抑制乳腺癌多药耐药的作用及机制。实验以人三阴性乳腺癌细胞亲本株MDA-MB-231,及其阿霉素耐药细胞株MDA-MB-231/ADR为研究对象，通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力；DAPI染色和Annexin-V/Pi凋亡双染检测细胞凋亡，Western blot(WB)检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬酶(caspase)-9、caspase-3的表达水平，免疫荧光染色观察Nrf2细胞内分布，流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平。实验结果显示SCL的耐药因子是0.69,对应地，阿霉素和紫杉醇的耐药因子分别是8.40、16.36;DAPI染色结果显示SCL能够导致乳腺癌细胞核皱缩、碎裂；Annexin-V/Pi凋亡双染显示，在中、高剂量SCL的作用下，耐药细胞的平均凋亡率分别为32.64%、50.29%;WB检测结果提示：SCL能够明显降低抗凋亡蛋白Bcl-2、caspase-9和caspase-3表达水平，明显升高促凋亡蛋白Bax表达水平，进一步研究发现，SCL能够显著促进Keap1的表达，并明显抑制Nrf2和HO-1的表达，同时能够明显减少Nrf2的入核表达水平；相应地，流式检测细胞内ROS水平明显升高。综上所述，瑞香狼毒能够显著抑制三阴性乳腺癌MDA-MB-231多药耐药细胞的增殖，引起细胞凋亡，其机制与抑制Keap1/Nrf2信号通路，导致耐药细胞内ROS累积，并增加凋亡相关蛋白的表达有关。
2024年08期 v.49 2222-2229页 [查看摘要][在线阅读][下载 1847K] [引用频次：2 ] |[下载次数：675 ] - 贺君宇;杨家鑫;覃诗颖;郑婧琪;国怡然;马天行;
木瓜总三萜(total triterpenoids from the fruits of Chaenomeles speciosa, TCS)是防治胃黏膜损伤的活性组分，具有潜在的抗衰老作用。然而，TCS是否改善胃衰老，尤其是对于其抗胃衰老的分子机制目前仍不清楚。基于此，该研究旨在探讨TCS对D-半乳糖(D-galactose, D-gal)诱导人胃黏膜上皮细胞GES-1衰老的影响及作用机制，为TCS在临床上用于预防胃衰老提供科学数据。将体外培养的GES-1细胞和转染谷氨酰胺酶1(glutaminase 1, GLS1)过表达(overexpression GLS1, GLS1-OE)质粒的GES-1细胞用D-gal诱导衰老后，给予TCS和谷氨酰胺酶1(glutaminase 1, GLS1)抑制剂bis-2-(5-phenylacetamido-1,2,4-thiadiazol-2-yl) ethyl sulfide(BPTES),考察各组细胞存活率、衰老标志物β-半乳糖苷酶(β-galactosidase, SA-β-gal)染色阳性细胞比例、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)和细胞凋亡的变化；采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay, ELISA)法和比色法检测各组细胞上清液和细胞内GLS1活性、谷氨酰胺(glutamine, Gln)、谷氨酸(glutamate, Glu)、α-酮戊二酸(α-ketoglutarate,α-KG)、尿素和氨水平；采用实时荧光定量PCR和Western blot法检测各组细胞中GLS1、线粒体凋亡信号通路相关基因mRNA和蛋白表达情况。结果显示，与D-gal模型组和GLS1-OE D-gal模型组相比，TCS可显著降低D-gal诱导衰老GES-1细胞和GLS1-OE衰老GES-1细胞SA-β-gal染色阳性细胞率和MMP,抑制衰老细胞存活，促进其细胞凋亡(P<0.01),降低上清液和细胞内GLS1活性和Gln、Glu、α-KG、尿素、氨含量(P<0.01),降低线粒体中细胞色素C(cytochrome C, Cyto C)浓度以及细胞中GLS1、增殖细胞核抗原mRNA和蛋白表达(P<0.01),降低细胞中Bcl-2、Bcl-xl mRNA表达和前体半胱氨酸蛋白酶(pro-caspase)-9、pro-caspase-3蛋白表达以及Bcl-2/Bax和Bcl-xl/Bad比值(P<0.01),升高胞质中Cyto C浓度和细胞中Bax、Bad、凋亡蛋白酶激活因子1(apoptosis protease activating factor 1, Apaf-1)mRNA表达及剪切型半胱氨酸蛋白酶(cleaved-caspase)-9、cleaved-caspase-3、剪切型聚ADP核糖聚合酶-1(cleaved-poly ADP ribose polymerase-1, cleaved-PARP-1)蛋白表达(P<0.01)。以上结果表明，TCS可对抗D-gal诱导GES-1细胞衰老，其作用机制与抑制Gln/GLS1/α-KG代谢轴、激活线粒体凋亡通路，进而促进衰老细胞凋亡、清除衰老细胞密切相关。
2024年08期 v.49 2230-2246页 [查看摘要][在线阅读][下载 3031K] [引用频次：1 ] |[下载次数：1285 ] - 袁蓓欣;陈兰英;汪文龙;李安;谢欣序;段文彬;刘荣华;
应用微循环可视化技术和代谢组学方法，探讨交趾黄檀改善微球栓塞所致大鼠冠脉微循环障碍(coronary microcirculation dysfunction, CMD)的作用及可能机制。选取60只SPF级雄性SD大鼠，随机分为假手术组、模型组、交趾黄檀水提物低剂量组(生药材1.5 g·kg~(-1)·d~(-1))、交趾黄檀水提物中剂量组(生药材3.0 g·kg~(-1)·d~(-1))和交趾黄檀水提物高剂量组(生药材6.0 g·kg~(-1)·d~(-1)),假手术和模型组大鼠给予等体积生理盐水，灌胃给药，每日1次，连续7 d。采用左心室注射聚乙烯微球法制备大鼠CMD模型，假手术组注射等量生理盐水。采用血流量仪测定血流量；血液流变仪检测血液黏度和纤维蛋白原含量；全自动生化分析仪和试剂盒检测血清心肌酶水平、葡萄糖含量、一氧化氮含量；苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察心肌组织病理学变化；采用DiI C12/C18混合灌注冠脉微血管，再通过激光共聚焦显微镜观察其结构及形态变化，最后使用AngioTool软件对微球栓塞区域血管面积、血管密度、血管半径、空隙度进行分析，并依据泊肃叶定律计算微血管血流阻力；高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(UPLC-Q-TOF-MS)技术进行非靶向代谢组学分析，筛出潜在的生物标志物及交趾黄檀回调的差异代谢物并富集代谢通路。与模型组的相比，药效学结果表明，交趾黄檀能显著升高平均血流量(mean blood flow, MBF),显著降低血浆纤维蛋白原含量，显著降低心肌酶指标肌酸激酶(creatine kinase, CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB,CK-MB)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)水平，减轻心肌损伤，保护受损心肌，显著升高血清中一氧化氮(nitric oxide, NO)含量，促进血管平滑肌松弛，扩张血管，显著降低血清中葡萄糖(glucose, GLU)水平，改善心肌能量代谢，减轻心肌纤维溶解和炎性细胞浸润的病理变化。冠脉微循环灌注结果显示，交趾黄檀能改善CMD大鼠微血管形态，增加微血管面积、密度、半径，降低微血管空隙度和血流阻力，改善微血管内皮损伤。代谢组学结果显示，与假手术组比较，模型组共筛出45个差异代谢物，交趾黄檀可以回调其中25个差异代谢物，涉及花生四烯酸代谢、精氨酸生物合成、鞘脂代谢等8条通路有关。交趾黄檀能有效改善微球栓塞大鼠所致的冠脉微循环障碍，其可能通过影响炎症通路、内皮损伤和磷脂代谢等途径从而改善CMD大鼠的病理变化。
2024年08期 v.49 2247-2261页 [查看摘要][在线阅读][下载 3250K] [引用频次：2 ] |[下载次数：805 ] - 杨沛勋;范小雪;刘忞璇;刘婧;曹亮;王振中;王欣;张新庄;肖伟;
探究淫羊藿总黄酮胶囊对脑卒中后认知障碍(post-stroke cognitive impairment, PSCI)大鼠的作用。构建大鼠大脑中动脉短暂性缺血(transient middle cerebral artery occlusion, tMCAO)模型，将出现神经功能受损的大鼠随机分为模型对照组，淫羊藿总黄酮胶囊低、中、高剂量组，尼莫地平片组。给药后检测大鼠认知功能，苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察脑组织病理变化，免疫荧光法检测脑组织中神经元细胞标记物(neuronal nuclei, NeuN)和星形胶质细胞标记物(glial fibrillary acidic protein, GFAP)表达分布情况；检测大鼠血清中β淀粉样蛋白1-42(amyloid beta 1-42,Aβ_(1-42))、神经元烯醇化酶(neuron specific enolase, NSE)、乙酰胆碱(acetylcholine, ACH)、多巴胺(dopamine, DA)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)、去甲肾上腺素(norepinephrine, NE)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和超敏C反应蛋白(hypersensitive C-reactive protein, hs-CRP)的含量。另外，采用Western blot检测海马组织中核转录因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)、p-NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(alpha inhibitor of NF-κB,IκBα)、p-IκBα蛋白的表达量。实验结果显示，淫羊藿总黄酮胶囊可改善模型大鼠的认知功能，其作用机制可能是通过调节p-IκBα和p-NF-κB蛋白的表达，进而抑制缺血再灌注引起的炎症反应。
2024年08期 v.49 2262-2272页 [查看摘要][在线阅读][下载 3012K] [引用频次：5 ] |[下载次数：770 ]