- 沈鑫蕾;朱清如;余文凯;周莉;单琪媛;张易航;鲍旖旎;曹岗;
探讨盐炙车前子对大鼠肾纤维化的影响及作用机制。选取36只SD大鼠，分成空白组，模型组，氯沙坦钾组，盐炙车前子低、中、高剂量组(15、30、60 g·kg~(-1))。除空白组外，其余各组采用单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction, UUO)手术建立大鼠肾纤维化模型，造模和灌胃给药周期均为14 d。连续给药14 d后，采用全自动生化仪检测各组大鼠血清肌酐(se-rum creatinine, Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)水平；通过苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)及Masson染色评价肾脏组织病理变化；Western blot及免疫荧光法检测肾脏组织纤连蛋白(fibronectin, FN)、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平；采用RT-qPCR测定肾小管上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)关键基因扭曲家族bHLH转录因子1(twist family bHLH transcription factor 1,TWIST1)、蜗牛家族转录抑制因子1(snail family transcriptional repressor 1,SNAI1)、E盒结合锌指蛋白1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1),以及炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的基因表达水平。体外建立转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导肾小管上皮HK-2细胞纤维化模型，考察盐炙车前子对肾小管上皮细胞EMT的抑制作用。结合网络药理学和Western blot进一步研究盐炙车前子缓解肾纤维化的分子机制。结果表明，与模型组比较，盐炙车前子能明显降低UUO大鼠血清Scr、BUN水平，减少肾小管损伤和胶原沉积；也可显著抑制UUO大鼠肾脏组织及TGF-β刺激HK-2细胞中FN、collagenⅠ、vimentin、α-SMA的蛋白表达，以及SNAI1、ZEB1、TWIST1、IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达。进一步研究发现盐炙车前子含量显著增加的成分主要富集丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)信号通路，且盐炙车前子能显著降低UUO大鼠肾脏组织及TGF-β诱导HK-2细胞中MAPK通路关键蛋白细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase, ERK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38)的磷酸化水平。综上所述，盐炙车前子可能通过抑制MAPK信号通路，抑制肾小管上皮细胞EMT,发挥对肾纤维化的改善作用。
2025年05期 v.50 1195-1208页 [查看摘要][在线阅读][下载 3156K] [引用频次：0 ] |[下载次数：635 ] - 张洪怡;周靖惟;刘佳雯;费文波;黄仕如;陈玉梅;李重阳;李菲菲;马巧伶;王福;胡媛;刘友平;陈士林;陈林;陈鸿平;
该研究对17批牡蛎(近江牡蛎)“药材-煅制饮片-饮片标准汤剂”过程的物相变化及量质传递进行分析。采用化学滴定法测定其主要成分碳酸钙(CaCO_3)含量，计算出膏率和转移率，牡蛎药材、饮片、标准汤剂的CaCO_3质量分数范围分别为94.39%～98.80%、95.03%～99.22%、84.58%～90.47%,药材-饮片得率范围96.85%～98.55%,CaCO_3转移率范围96.92%～99.27%,饮片-标准汤剂出膏率范围2.86%～5.48%,CaCO_3转移率范围2.59%～5.13%。X射线荧光光谱(X-ray fluorescence, XRF)分析结果显示三者主要含钙(Ca)、钠(Na)、镁(Mg)、硅(Si)、氯(Cl)、溴(Br)、铝(Al)、铁(Fe)、铬(Cr)、锰(Mn)、钾(K)等元素，化学计量学结果显示药材-饮片差异性元素Cr、Fe、Si相对含量增加，饮片-标准汤剂Mg、Al、Br、K、Cl、Na等差异性元素的相对含量增加。采用粉末X射线衍射光谱(X-ray diffraction, XRD)技术建立了牡蛎药材、饮片和标准汤剂的XRD特征图谱，分析可见药材-饮片-标准汤剂过程中，三者主要物相均为方解石型CaCO_3,未见晶型的转变或新物相的产生。采用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy, FTIR)技术建立了牡蛎药材、饮片和标准汤剂的FTIR特征图谱，分析结果显示药材中存在O-H、C-H、C=O、C-O和CO_3~(2-)等基团的内部振动，煅制后因有机质成分损失，饮片及其标准汤剂未见C-H、C=O、C-O等基团对应的特征峰信息。综上，该研究通过测定CaCO_3含量，计算出膏率和转移率，比较药材-饮片-标准汤剂三者的元素变化，FTIR特征图谱及XRD特征图谱的差异，阐明了牡蛎药材-煅牡蛎饮片-标准汤剂过程的量质传递及物相变化，结果合理可靠，为后续煅牡蛎(近江牡蛎)配方颗粒的工艺研究和质量标准制定奠定了基础，为牡蛎等介类中药“药材-饮片-标准汤剂-配方颗粒”的全过程质量控制提供了思路与方法。
2025年05期 v.50 1209-1223页 [查看摘要][在线阅读][下载 3116K] [引用频次：2 ] |[下载次数：679 ]
- 杜羽佳;任娅迪;庄严;李恩泽;苗俊豪;于春月;
探讨核因子-κB(NF-κB)/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体信号通路在胃癌前病变中的发病机制，并进一步探讨胃复春胶囊治疗胃癌前病变的潜在分子机制。将90只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为正常饲养组和造模组，正常饲养组常规饮食；造模组采用N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)综合造模法建立胃癌前病变病证结合动物模型：120μg·mL~(-1) MNNG自由饮用、0.05%雷尼替丁饲料联合饥饱失常。15周后，正常饲养组随机分为空白组、空白-NF-κB激活剂组(C-BA组)和空白-NF-κB抑制剂组(C-PDTC组);造模组继续造模并随机分为模型组、胃复春胶囊组(WFC组)、模型-NF-κB激活剂组(M-BA组)和模型-NF-κB抑制剂组(M-PDTC组)。空白组和模型组予无菌水灌胃，每日1次；WFC组按照成人等效剂量(体质量60 kg)的6倍(432 mg·kg~(-1))给药，每日1次；C-BA组和M-BA组予NF-κB激活剂桦木酸(BA)腹腔注射，10 mg·kg~(-1),每周2次；C-PDTC组和M-PDTC组予NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代甲酸铵(PDTC)腹腔注射，50 mg·kg~(-1),每周2次；干预4周后取材。苏木素-伊红(HE)和过碘酸雪夫(AB-PAS)染色法观察胃黏膜病理组织学变化并评分，酶联免疫吸附法(ELISA)测定胃组织中炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-10的水平，蛋白免疫印迹法检测胃黏膜中NF-κB/NLRP3炎症小体相关蛋白的表达水平，免疫组化法检测胃黏膜中NF-κB/NLRP3炎症小体相关蛋白的阳性表达面积。结果显示，与空白组相比，模型组、C-BA组和M-BA组黏膜炎症、炎症活动程度、腺体萎缩及肠上皮化生评分显著升高，模型组和M-BA组异型增生评分显著升高。与模型组相比，WFC组黏膜炎症、炎症活动程度及腺体萎缩评分显著降低，肠上皮化生及异型增生评分降低。与空白组相比，模型组和C-BA组胃组织中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α水平显著升高；模型组IL-10水平显著升高；模型组和C-BA组胃黏膜中NF-κB p65、NLRP3、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、含有CARD结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)表达均显著升高，NF-κB p65、NLRP3和ASC阳性表达面积均显著升高。与模型组相比，WFC组胃组织中IL-1β、IL-6、IL-18、TNF-α、IL-10水平显著降低，M-PDTC组胃黏膜中IL-1β、IL-18、TNF-α水平显著降低；WFC组和M-PDTC组胃黏膜中NF-κB p65、磷酸化核因子-κB p65(p-NF-κB p65)、NLRP3、caspase-1表达显著降低，NF-κB p65、NLRP3和ASC阳性表达面积显著降低。综上，胃癌前病变的发生与NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路的激活密切相关，胃复春胶囊能够缓解黏膜炎症、改善腺体萎缩、部分逆转肠上皮化生、减轻异型增生，延缓“炎-癌转化”进程，并且能有效下调胃内炎性细胞因子的水平及通路相关蛋白的表达，故其作用机制可能与抑制NF-κB/NLRP3炎症小体信号通路有关。
2025年05期 v.50 1236-1246页 [查看摘要][在线阅读][下载 2796K] [引用频次：3 ] |[下载次数：1065 ] - 吴君;荆雪宁;孟繁伟;孔晓妮;苗久旺;张彩霞;李海伦;韩芸;
观察五苓散对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞纤维化、炎症和氧化应激的作用及其抗氧化应激损伤的机制。体外培养HK-2细胞，将细胞分为对照组、TGF-β1模型组、五苓散含药血清低剂量组(2.5%)、五苓散含药血清中剂量组(5.0%)和五苓散含药血清高剂量组(10.0%),除对照组外，其余各组采用TGF-β1造模。采用CCK-8分析不同浓度五苓散在含有或者不含有TGF-β1刺激HK-2细胞活性的影响。qPCR法检测纤维化关键分子肌动蛋白α2(Acta2)、Ⅰ型胶原α1(Col1α1)、Ⅲ型胶原α1(Col3α1)、金属肽酶抑制因子1(Timp1)和纤连蛋白1(Fn1)基因的表达；ELISA法检测炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)和白细胞介素-4(IL-4)的水平。采用谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)生化试剂盒分析五苓散对TGF-β1诱导HK-2细胞氧化应激损伤的作用，并通过qPCR和免疫荧光法分析核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)和NAD(P)H:醌氧化还原酶-1(NQO1)的表达。CCK-8结果显示，五苓散最佳给药质量分数分别为2.5%、5.0%、10.0%;与对照组比较，TGF-β1模型组纤维化关键分子(Acta2、Col1α1、Col3α1、Timp1、Fn1)和炎性细胞因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8和IL-4)的水平显著升高；与TGF-β1模型组比较，五苓散给药能够剂量依赖性地抑制纤维化关键分子和炎性细胞因子的水平；五苓散能够显著增加TGF-β1刺激HK-2细胞中GSH-Px、CAT和SOD的活性，并且显著抑制MDA的水平。此外，与对照组比较，TGF-β1模型组Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白的表达显著降低；五苓散干预后，能够显著增加Nrf2、HO-1和NQO1基因和蛋白的表达。相关性分析显示，在TGF-β1刺激的HK-2细胞模型中抗氧化应激酶(GSH-Px、CAT和SOD)和Nrf2信号与纤维化关键分子和炎性细胞因子呈显著负相关。综上，五苓散能够通过激活Nrf2信号通路，改善氧化应激损伤和炎症，抑制TGF-β1诱导HK-2细胞纤维化。
2025年05期 v.50 1247-1254页 [查看摘要][在线阅读][下载 1922K] [引用频次：0 ] |[下载次数：1020 ] - 袁中杰;肖悦;刘真;张爱群;李彬;高尚先;
探讨人参总次苷对缺氧下H9c2细胞凋亡和能量代谢的影响及可能作用机制。通过观察H9c2细胞活性和计算细胞凋亡率筛选出适宜的人参总次苷、抗霉素A复合物(AMA)、辅酶Q10(CoQ10)干预浓度和缺氧时长。将对数生长期的H9c2细胞分为正常组、模型组、人参总次苷组、AMA组、人参总次苷+AMA组、CoQ10组。除正常组外，其余各组加入相应的干预药物后缺氧培养。使用三磷酸腺苷(ATP)含量化学发光法测试盒和肌酸激酶(CK)比色法测试盒检测各组细胞中ATP的含量和CK的活性；通过流式细胞仪检测各组细胞凋亡率；采用Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9,线粒体生物发生相关蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)、雌激素相关受体α(ERRα)、核呼吸因子(NRF)-1、NRF-2、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα),以及Na~+-K~+-ATPase蛋白的水平；采用RT-PCR技术检测线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、NRF-2、PPARα和线粒体DNA中线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体细胞色素C氧化酶1(COX1)、线粒体NADH脱氢酶第一亚基(ND1)、ND2 mRNA的表达。筛选人参总次苷、AMA和CoQ10的干预浓度分别为7.5μg·mL~(-1)、10μmoL·L~(-1)、1×10~(-4) mol·L~(-1)。选择缺氧6 h为干预时长。与正常组相比，模型组H9c2细胞中ATP的含量和CK活性降低，凋亡率升高；凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低，Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达上升；线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、NRF-2、PPARα蛋白和mRNA表达下降；线粒体DNA中TFAM、COX1、ND1、ND2 mRNA的表达以及Na~+-K~+-ATPase蛋白表达下降。与模型组相比，人参总次苷组和CoQ10组细胞中ATP的含量和CK活性升高，凋亡率降低；人参总次苷组凋亡相关蛋白Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达下降，线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、PPARα蛋白和mRNA表达上升，NRF-2蛋白表达上升，线粒体DNA中TFAM mRNA表达升高；AMA组ATP的含量和CK活性降低，凋亡率升高，凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低，Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达上升，线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、NRF-2、PPARα蛋白和mRNA表达下降，线粒体DNA中TFAM、COX1、ND1、ND2 mRNA表达以及Na~+-K~+-ATPase蛋白表达下降。与人参总次苷组相比，人参总次苷+AMA组细胞中ATP的含量和CK活性降低，凋亡率升高，凋亡相关蛋白Bcl-2表达降低，Bax、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达上升，线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、NRF-2、PPARα蛋白和mRNA表达下降，线粒体DNA中TFAM、COX1、ND1、ND2 mRNA表达下降。与AMA组相比，人参总次苷+AMA组CK活性升高，凋亡率降低，凋亡相关蛋白Bcl-2表达升高，Bax、caspase-8、caspase-9表达下降，线粒体生物发生相关因子PGC-1α、ERRα、NRF-1、PPARα蛋白和mRNA表达上升，线粒体DNA中TFAM、COX1、ND1、ND2 mRNA表达以及Na~+-K~+-ATPase蛋白表达上升。因此，人参总次苷能够提高缺氧下H9c2细胞中ATP的含量和CK活性，抑制心肌细胞凋亡，其机制可能与调节PGC-1α、ERRα、NRF-1、NRF-2、PPARα、TFAM的表达，促进线粒体生物发生有关。
2025年05期 v.50 1255-1266页 [查看摘要][在线阅读][下载 1906K] [引用频次：3 ] |[下载次数：1074 ] - 张亮;陈俊杰;顾曼香;钟一帆;司渊;刘莹;
探讨钩毛茜草素C(RuC)抑制胃癌的分子机制。选取AGS和MGC803细胞株作为细胞模型。用不同浓度的RuC处理细胞后，通过CCK-8法、实时无标记细胞分析技术(RTCA)和克隆形成实验检测RuC对胃癌细胞增殖能力的影响；透射电镜检测亚细胞结构变化；免疫荧光技术检测LC3荧光聚点；吖啶橙染色法检测细胞内溶酶体状态；蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62的表达及溶酶体组织蛋白酶D(CTSD)的表达；SuperPred在线预测与RuC结合的靶点蛋白；通过分子对接分析RuC与CTSD的作用位点；采用靶点稳定性药物亲和反应实验检测RuC与CTSD的直接结合作用。结果发现，RuC在低浓度剂量下能够显著抑制胃癌细胞的增殖及克隆形成，RuC对AGS和MGC803细胞24 h半数抑制浓度分别为3.422、2.697μmol·L~(-1)。1、2、3μmol·L~(-1) RuC处理24 h后，AGS细胞克隆形成率分别为61.0%±1.5%、28.0%±0.5%、18.2%±0.5%,MGC803细胞克隆形成率分别为56.0%±0.5%、23.3%±1.0%、11.8%±1.0%,均明显减少。透射电镜检测显示RuC促进胃癌细胞自噬体增加；免疫荧光检测显示胃癌细胞LC3荧光聚点随RuC剂量增加。RuC上调胃癌细胞自噬相关蛋白LC3Ⅱ、P62的表达。吖啶橙染色表明RuC可致溶酶体酸性环境改变。SuperPred在线预测发现CTSD是RuC的潜在靶点蛋白。蛋白免疫印迹分析发现RuC诱导胃癌细胞中CTSD的非活性前体表达上调。CTSD活性检测表明RuC可降低CTSD的活性。分子对接模拟发现RuC与CTSD的底物结合区域结合，与其中的Tyr205、Asp231氨基酸残基形成氢键。微量热泳动实验、靶点稳定性的药物亲和反应实验进一步确证RuC与CTSD具有直接结合作用。综上表明，RuC通过靶向结合下调CTSD表达而抑制溶酶体活性，进而诱导胃癌细胞自噬体积累。
2025年05期 v.50 1267-1275页 [查看摘要][在线阅读][下载 2866K] [引用频次：0 ] |[下载次数：468 ] - 刘文杰;涂玥;何伟明;刘思逸;潘刘云馨;温开智;李成娟;韩超;
研究大黄蛰虫丸(DHZCP)延缓心脏衰老(HA)的作用，并探讨其潜在的作用机制。采用网络药理学和分子对接，探究DHZCP延缓HA的靶点和潜在作用机制，并采用DHZCP含药血清对D-半乳糖(D-gal)诱导的衰老心肌细胞关键靶点和通路进行体外实验验证。通过TCSMP数据库筛选DHZCP的活性成分，并预测起作用的相关靶点；通过GeneCards数据库、OMIM数据库和DisGeNET数据库筛选整合HA相关靶点；将DHZCP活性成分靶点与HA靶点取交集后，通过STRING 12.0数据库构建蛋白-蛋白相互作用网络，并运用Cytoscape 3.9.1软件基于degree筛选核心靶点；通过Metaspace平台对核心靶点进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析以预测作用机制；并通过AutoDock Vina平台进行分子对接验证。结果显示，共筛选DHZCP活性成分靶点774个，HA相关靶点4 520个，取交集后共得到交集靶点510个，其中核心靶点有B细胞淋巴瘤2基因(BCL-2)、丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)和缺氧诱导因子1亚基A(HIF1A)等。GO和KEGG富集分析提示DHZCP主要通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路、HIF-1α信号通路、长寿信号通路和凋亡等发挥作用。结合GO和KEGG通路富集分析，选择PI3K/AKT/HIF-1α信号通路进行验证。CCK-8检测显示，D-gal能显著抑制H9c2细胞增殖，DHZCP含药血清能增加H9c2细胞活性；SA-β-gal染色检测显示，D-gal组蓝绿色阳性细胞数量显著增加，DHZCP含药血清可以减少蓝绿色阳性细胞数量；TUNEL染色检测显示，DHZCP含药血清可以减少凋亡细胞的数量；经DHZCP含药血清处理后，Klotho、BCL-2、p-PI3K/PI3K、p-AKT1/AKT1和HIF-1α蛋白表达上调，P21、P16、BCL-2相关X蛋白(Bax)和cleaved caspase-3蛋白表达受抑制。结果表明，DHZCP是通过多成分、多靶点和多途径发挥延缓HA的作用，其机制可能是通过激活PI3K/AKT/HIF-1α信号通路减少细胞凋亡而实现的。
2025年05期 v.50 1276-1285页 [查看摘要][在线阅读][下载 2225K] [引用频次：2 ] |[下载次数：1706 ] - 陆长叶;袁晓敏;何林海;冒佳蓉;陈玉根;
探讨黄蜀葵花总黄酮(TFA)通过调控肠道菌群重塑甘油磷脂代谢，进而抑制巨噬细胞M1极化治疗溃疡性结肠炎(UC)与抑郁共病的作用机制。建立慢性束缚应激(CRS)与葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的UC抑郁共病小鼠模型。采用TFA干预后的粪菌移植(FMT)实验，FMT供体组小鼠经造模及给药后取粪便制备菌液，FMT受体组小鼠经抗生素干预后予供体组菌液灌胃，继而进行UC抑郁造模。实验结束后，进行行为学测试，并检测小鼠脑海马组织中5-羟色胺(5-HT)、脑源性神经营养因子(BDNF)水平评估抑郁样行为，检测小鼠脑、结肠组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平，检测CD86、CD206 mRNA水平评估巨噬细胞极化状态；采用16S核糖体RNA(16S rRNA)测序技术分析小鼠肠道菌群变化；广靶脂质组学检测FMT后小鼠血清脂质水平，将TFA显著调节的差异肠道微生物与脂质做关联分析；体外实验中，使用代表性甘油磷脂代谢物及甘油磷脂抑制剂干预Raw264.7巨噬细胞，检测TNF-α、IL-6、IL-1β、CD86、CD206 mRNA水平。结果显示，TFA及其干预后的FMT可明显改善UC抑郁共病小鼠抑郁样行为及肠道炎症，明显下调脑、结肠组织促炎细胞因子及明显下调脑、结肠组织促炎细胞因子及CD86 mRNA表达，抑制巨噬细胞M1极化，显著上调CD206 mRNA表达，促进巨噬细胞M2极化，高剂量组效果更加显著。TFA干预后的FMT显著纠正了UC抑郁共病小鼠甘油磷脂代谢紊乱，差异肠道菌群与甘油磷脂存在显著相关性。体外实验显示，甘油磷脂代谢物尤其是溶血磷脂酰胆碱(LPC),显著上调促炎细胞因子及CD86 mRNA表达，促进巨噬细胞M1极化，甘油磷脂抑制剂效果反之。结果表明，TFA通过纠正肠道菌群紊乱重塑甘油磷脂代谢，进而抑制巨噬细胞M1极化，有效治疗UC抑郁共病。
2025年05期 v.50 1286-1297页 [查看摘要][在线阅读][下载 2908K] [引用频次：1 ] |[下载次数：1562 ] - 何星灵;李思静;李姿儒;刘东华;张小娇;何欢;董晓明;龙文杰;张维维;廖慧丽;鲁路;杨忠奇;倪世豪;
探讨桂枝通络片(GZTL)对动脉粥样硬化(AS)小鼠的疗效及作用机制。载脂蛋白E基因敲除(ApoE~(-/-))小鼠被随机分为模型(model)组，GZTL高、中、低剂量组，阿托伐他汀(ATV)组，取同周龄C57BL/6J小鼠为对照组(control)。除control组外，ApoE~(-/-)小鼠通过高脂喂养建立AS模型，持续灌胃给药8周。观察小鼠一般情况及血瘀表现，记录体质量，采用苏木素-伊红(HE)、Masson和油红O染色评价主动脉斑块病变及稳定性；采用生化法检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平；采用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；采用TUNEL法观察细胞凋亡情况；获取单细胞测序数据，分别分析CD72hi巨噬细胞(CD72hi-Mφ)在AS患者与小鼠主动脉中的表达差异；免疫荧光法观察小鼠主动脉斑块中CD72hi-Mφ的表达情况；实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平。结果显示，与control组比较，model组小鼠体质量明显升高，主动脉斑块病变、坏死核心与脂质沉积的面积占比均明显增加，胶原纤维含量显著降低，细胞凋亡增多；血清TC、TG、LDL-C含量及炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平明显升高，主动脉组织IL-1β、TNF-α和IL-6 mRNA表达水平显著升高；与model组比较，GZTL各剂量组及ATV组体质量均有降低趋势，GZTL中、高剂量和ATV组主动脉斑块病变、坏死核心与脂质沉积的面积占比均显著改善，胶原纤维含量明显增加，细胞凋亡减少；血清TC、TG、LDL-C含量及炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6水平明显降低；单细胞数据分析结果显示，与正常动脉组织比较，AS患者颈动脉斑块病变处CD72hi-Mφ信号明显升高；动物实验进一步证实，CD72hi-Mφ和一系列促炎因子在AS小鼠主动脉中的表达显著升高，GZTL干预可使其表达量降低。综上，GZTL可能通过抑制CD72hi-Mφ缓解AS。
2025年05期 v.50 1298-1309页 [查看摘要][在线阅读][下载 3704K] [引用频次：0 ] |[下载次数：897 ] - 蒋义芳;黄渝清;赖恒周;李雪珂;龙柳伊;由凤鸣;旷歧轩;
探究半夏泻心汤通过重塑色氨酸代谢抑制结肠癌进展的效应及机制。将Balb/c小鼠分为对照(control)组、模型(model)组、半夏泻心汤低剂量(BXD-L)组和半夏泻心汤高剂量(BXD-H)组。除control组外，其余各组皮下注射CT26-Luc细胞建立结肠癌模型，并予以半夏泻心汤进行干预。采用小动物活体成像监测肿瘤生长情况，并测量肿瘤体积和质量；苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肿瘤组织病理改变；采用免疫组化法检测肿瘤组织Ki67表达；免疫荧光法和流式细胞术检测肿瘤组织中CD3~+/CD8~+ T细胞浸润情况和数目变化，酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肿瘤组织中干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素2(IL-2)含量变化；靶向代谢组学检测血清中色氨酸(Trp)代谢变化，并测量肿瘤组织中色氨酸含量，采用蛋白免疫印迹(Western blot)法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测肿瘤组织中吲哚胺2,3-双加氧酶1(IDO1)、原癌基因MYC、溶质载体基因家族7成员5(SLC7A5)蛋白及mRNA水平变化。同时，在体外建立“CT26结肠癌细胞+CD8~+ T细胞”共培养模型，予以半夏泻心汤含药血清干预，采用细胞增殖与活性检测-8(CCK-8)法检测CT26细胞活性，分别测量CT26细胞和CD8~+ T细胞Trp含量、CD8~+ T细胞IFN-γ和IL-2的分泌情况；采用RT-qPCR法检测CT26细胞中MYC、SLC7A5 mRNA水平变化。结果显示半夏泻心汤干预后，可明显抑制小鼠结肠癌肿瘤增长，减轻瘤质量、缩小肿瘤体积；组织病理学显示肿瘤细胞排列稀疏，且有不同程度的片状坏死区，且肿瘤组织中增殖标志物Ki67水平表达降低；半夏泻心汤可升高肿瘤组织中IFN-γ、IL-2含量，同时上调CD3~+/CD8~+ T细胞比例，并且降低Trp、IDO1、MYC和SLC7A5含量。体外共培养实验表明半夏泻心汤含药血清可降低CT26细胞对Trp的摄取、增加CD8~+T细胞Trp含量，并增强CD8~+T细胞IL-2、IFN-γ的分泌，同时降低CT26细胞中MYC、SLC7A5 mRNA含量。综上所述，半夏泻心汤能够抑制MYC/SLC7A5通路重塑结肠癌Trp代谢，调复CD8~+ T细胞对Trp摄取而增加其细胞毒性，从而抑制结肠癌发展。
2025年05期 v.50 1310-1320页 [查看摘要][在线阅读][下载 2585K] [引用频次：0 ] |[下载次数：1025 ] - 王天;刘砥威;王桐叶;张兴宇;邢建国;郑瑞芳;
探讨香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica, TFDM)对大鼠H9c2细胞通过缺氧缺糖/复氧(oxygen-glucose deprivation and reoxygenation, OGD/R)损伤和衣霉素(tunicamycin, TM)建立内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS)诱导细胞凋亡的影响，并探索可能的作用机制。造模成功后，将大鼠分为对照组，模型(OGD/R或TM)组，TFDM低、中、高(12.5、25、50μg·mL~(-1))剂量组。体外构建OGD/R损伤模型，cell counting kit-8(CCK-8)法检测TFDM对细胞增殖的影响；检测细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase MB isoenzyme, CKMB)水平；Western blot检测葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulatory protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein, CHOP)、活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)和B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X-protein, Bax)的表达。采用脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)法检测细胞凋亡。TM诱导ERS模型中，Western blot检测TM组中ERS通路相关蛋白GRP78、CHOP、肌醇需求酶1(inositol-requiring enzyme 1,IRE1)、X-框结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase, PERK)、真核翻译起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2α,eIF2α)、ATF6、磷酸化ATF6(phospho-ATF6,p-ATF6)和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、半胱天冬氨酸蛋白水解酶-12(cysteinyl aspartate specific proteinase-12,caspase-12)、活性caspase-12(cleaved caspase-12,cleaved caspase-12)的表达；实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)检测GRP78、CHOP、PERK和ATF6的基因表达；采用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果显示，在OGD/R模型中，与对照组相比，OGD/R组细胞上清液LDH和CKMB水平显著升高；与OGD/R组相比，TFDM组细胞上清液LDH和CKMB水平显著降低。Western blot结果显示，与对照组相比，OGD/R组ERS相关蛋白和Bax蛋白表达显著增加，Bcl-2蛋白表达显著下降；与OGD/R组相比，TFDM组ERS相关蛋白和Bax蛋白表达显著降低，Bcl-2蛋白表达显著增加。TUNEL法显示TFDM处理后细胞凋亡显著降低。TM诱导ERS实验中，与对照组相比，TM组ERS相关基因的表达及ERS相关蛋白和凋亡蛋白的表达均显著增加，Bcl-2蛋白表达显著降低；与TM组相比，TFDM组ERS相关基因的表达及ERS相关蛋白和凋亡蛋白表达显著降低，Bcl-2蛋白表达显著增加。结果提示，OGD/R损伤H9c2细胞模型中存在ERS,且TFDM能有效抑制ERS诱导的细胞凋亡，其机制可能与下调ERS通路相关蛋白和凋亡蛋白的表达有关。
2025年05期 v.50 1321-1330页 [查看摘要][在线阅读][下载 2665K] [引用频次：1 ] |[下载次数：623 ] - 赵梓彤;涂鹏程;孙孝先;潘娅岚;郭杨;王礼宁;马勇;
明确灵仙新苷保护骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)免受缺氧诱导的细胞凋亡的作用及机制。采用骨片法提取骨髓间充质干细胞，流式细胞技术鉴定BMSCs;在正常培养状态(37℃,5%CO_2)和缺氧状态(37℃,90%N_2,5%CO_2)培养BMSCs,同时使用灵仙新苷进行干预，将BMSCs分为空白组(正常状态培养)、灵仙新苷组(正常状态培养+灵仙新苷)、缺氧24 h组(缺氧状态培养24 h)、灵仙新苷缺氧24 h组(缺氧状态培养24 h+灵仙新苷)、缺氧48 h组(缺氧状态培养48 h)、灵仙新苷缺氧48 h组(缺氧状态培养48 h+灵仙新苷)、缺氧72 h组(缺氧状态培养72 h)、灵仙新苷缺氧72 h组(缺氧状态培养72 h+灵仙新苷)8组，cell counting kit-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖活性，TUNEL法检测细胞凋亡率，MitoTracker?Red CM-H2XRo线粒体染色检测线粒体总量，DCFH-DA荧光探针染色检测细胞内活性氧水平，JC-1染色检测细胞线粒体膜电位，Western blot检测细胞内B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(B-cell lymphoma-2 associated X protein, BAX)、半胱天冬蛋白酶-3(caspase-3)和视神经萎缩蛋白1(optic atrophy 1,OPA1)蛋白的表达变化。结果显示，灵仙新苷可以显著提高细胞的增殖活性；与空白组相比，缺氧组的BMSCs凋亡率显著增加，线粒体数量显著减少，ROS水平显著升高，线粒体膜电位显著下降，BAX和caspase-3蛋白表达显著升高，OPA1蛋白表达显著下降；与相同缺氧时间下的缺氧组相比，灵仙新苷干预后细胞凋亡率显著下降，线粒体数量显著增多，ROS水平显著下降，线粒体膜电位显著升高，BAX和caspase-3蛋白表达显著下降，OPA1蛋白表达显著升高。由此得出，灵仙新苷可能通过调控OPA1来维持BMSCs线粒体稳态，从而发挥对缺氧环境下的BMSCs的抗凋亡作用。
2025年05期 v.50 1331-1339页 [查看摘要][在线阅读][下载 2090K] [引用频次：0 ] |[下载次数：542 ] - 戴国梁;陈泽瑀;王艳军;边欣芳;陈瑜洁;孙冰婷;王晓勇;居文政;
基于代谢组学与网络药理学整合策略探讨交泰丸治疗抑郁症的作用机制。运用UHPLC-Orbitrap Exploris 480对交泰丸的化学成分进行系统鉴定，基于在线数据库获取交泰丸成分作用靶点及抑郁症疾病靶点，利用STRING和Cytoscape 3.7.2构建交泰丸治疗抑郁症核心靶点的蛋白-蛋白互作网络及“化合物-靶点-通路”网络，采用DAVID数据库对核心靶点进行基因本体论(Gene Ontology, GO)功能和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路富集分析。进一步构建慢性不可预知温和刺激(chronic unpredictable mild stress, CUMS)抑郁小鼠模型，给予不同剂量的交泰丸，观察小鼠行为学及海马组织病理形态变化。运用UHPLC-Orbitrap Exploris 120对抑郁模型小鼠血清代谢谱进行分析，筛选差异代谢物及相关代谢通路，并构建“代谢物-反应-酶-基因”网络进行代谢组学与网络药理学整合分析。结果显示，共鉴定出交泰丸相关成分34个，结合网络药理学分析，共获取交泰丸治疗抑郁症的核心靶点143个，上述靶点主要涉及鞘脂、神经营养因子、精氨酸和脯氨酸代谢等通路。动物实验结果表明，交泰丸可显著改善CUMS抑郁模型小鼠的抑郁样行为及海马组织病理形态。此外，交泰丸对CUMS抑郁模型小鼠血清中参与鞘脂代谢、卟啉代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等代谢通路的32种代谢物具有显著回调作用，进一步整合分析显示半胱氨酸和蛋氨酸代谢、精氨酸和脯氨酸代谢以及卟啉代谢可能是交泰丸治疗抑郁症的关键通路。综上所述，该研究基于代谢组学与网络药理学整合策略初步阐明交泰丸抗抑郁的作用机制，可进一步为交泰丸抗抑郁的临床应用提供现代科学依据。
2025年05期 v.50 1340-1350页 [查看摘要][在线阅读][下载 3171K] [引用频次：1 ] |[下载次数：2293 ] - 杨康;刘俊;周麟岚;刘云霄;杜春林;梅孝枝;黄英如;
冷冻保存是目前用于同种异体组织体外保存的主要技术，但往往因保存过程中的低温、缺血、缺氧等因素导致冷冻保存失败。该研究基于四逆汤抗氧化、抗凋亡的药理特性，探讨其减轻大鼠坐骨神经冷冻保存损伤的可能性。按照《中国药典》煎煮四逆汤，经CCK-8法评估四逆汤对Rsc96细胞的毒性，选取质量浓度4、8、16 mg·mL~(-1)作为四逆汤低、中、高剂量组用于大鼠坐骨神经冷冻保存，并设置空白组和新鲜神经对照组。使用流式细胞术和TUNEL染色检测冷冻保存后神经组织的细胞凋亡；Western blot检测冷冻保存后神经组织凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶3(caspase-3)、半胱天冬蛋白酶8(caspase-8)]的表达水平，以及促进神经再生的神经营养因子(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白体外表达；通过检测还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP),评估冷冻保存后神经组织氧化损伤。最后将冷冻保存后的神经用于同种异体移植，移植术后1周，CD4~+、CD8~+ T淋巴细胞表面蛋白荧光双染评估移植神经段炎症细胞入侵，ELISA法评估受体血清炎症因子[白细胞介素-1(IL-1)、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]的表达；移植术后20周，电生理和神经丝蛋白NF200染色评估移植后神经再生情况。结果显示，低于32 mg·mL~(-1)的四逆汤对Rsc96细胞不具有细胞毒性；在体外神经冷冻保存中，与空白组相比，四逆汤低、中、高剂量组细胞凋亡、ROS和MDA的产生明显减少，高剂量组NGF和BDNF蛋白体外表达水平及ATP、SOD、GSH的生成明显增加；移植术后1周的排斥反应方面，与新鲜神经对照组比较，四逆汤低、中剂量组移植段神经CD4~+、CD8~+ T细胞入侵和受体血清IL-1、IFN-γ、TNF-α表达均下调；移植术后20周神经的再生方面，与空白组和新鲜神经对照组相比，四逆汤中、高剂量组电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)、神经传导速度(NCV)、神经丝蛋白NF200荧光染色结果均较好。结果表明，四逆汤对大鼠坐骨神经冷冻保存发挥了保护作用，在组织、器官体外保存领域具有潜力。
2025年05期 v.50 1351-1362页 [查看摘要][在线阅读][下载 3814K] [引用频次：0 ] |[下载次数：391 ]