- 李静;段群军;沈健;
探究白藜芦醇(RES)预处理通过微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)抑制基质相互作用分子2(STIM2)改善线粒体的功能减轻心肌缺血再灌注(IR)损伤的作用机制。将90只大鼠随机分成假手术(sham)组、模型(IR)组、IR+RES组(50 mg·kg~(-1) RES)、IR+RES+antagomir NC组(50 mg·kg~(-1) RES+80 mg·kg~(-1) antagomir NC)、IR+RES+miR-20b-5p antagomir组(50 mg·kg~(-1) RES+80 mg·kg~(-1) miR-20b-5p antagomir),每组18只。使用冠状动脉左前降支结扎法建立IR大鼠模型,术前2周IR+RES组大鼠腹腔注射50 mg·kg~(-1) RES,sham组、IR组注射等剂量生理盐水,每日1次。超声仪检测各组大鼠左室舒张末期内径(LVIDd)、左心室收缩末期内径(LVIDs);2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)法及苏木精-伊红(HE)染色法分别检测心肌梗死面积及组织病理学情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测心肌组织miR-20b-5p表达。通过氧糖剥夺/复氧(OGD/R)构建H9c2心肌细胞OGD/R模型;CCK-8法检测H9c2细胞活力;H9c2细胞分为空白(control)组、OGD/R组、OGD/R+RES组(25μmol·L~(-1))、OGD/R+RES+inhibitor NC组、OGD/R+RES+miR-20b-5p inhibitor组、mimic NC组、miR-20b-5p mimic组、inhibitor NC组、miR-20b-5p inhibitor组;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、cleaved-半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase 3)、STIM2表达;根据线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒、活性氧(ROS)检测试剂盒、三磷酸腺苷(ATP)测定试剂盒分别检测MMP、ROS、ATP水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与STIM2靶向关系。与sham组相比,IR组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著增加,miR-20b-5p表达显著降低(P<0.05);与IR组相比,IR+RES组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著降低,miR-20b-5p表达显著增加(P<0.05);与IR+RES组相比,IR+RES+miR-20b-5p antagomir组心肌梗死面积、LVIDd、LVIDs、心肌组织病理程度显著增加,miR-20b-5p表达显著降低(P<0.05)。与control组相比,OGD/R组H9c2细胞活力显著下降(P<0.05),H9c2细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著增加,Bcl-2表达、MMP、ATP水平显著降低(P<0.05);与OGD/R组相比,OGD/R+RES组(25、50、100μmol·L~(-1))细胞活力显著增加(P<0.05),细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著降低,Bcl-2表达、MMP、ATP水平显著增加(P<0.05);与OGD/R+RES组相比,OGD/R+RES+miR-20b-5p inhibitor组细胞凋亡率、Bax和cleaved-caspase 3表达、ROS水平显著增加,Bcl-2表达、MMP、ATP水平显著降低(P<0.05);miR-20b-5p与STIM2存在靶向关系;与mimic NC组相比,miR-20b-5p mimic组STIM2表达显著降低(P<0.05);与inhibitor NC组相比,miR-20b-5p inhibitor组STIM2表达显著增加(P<0.05)。RES预处理可通过促进miR-20b-5p表达来抑制STIM2表达,以此改善线粒体的功能,减轻心肌IR损伤。
2022年18期 165-173页 [查看摘要][在线阅读][下载 843K] [引用频次:11 ] |[下载次数:776 ] - 刘雪婷;陈文佳;刘维;李培豪;胡永昊;林娜;张彦琼;
从“病-证-方”关联角度,探索天和追风膏治疗类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)寒湿痹阻证的作用机制,并分析膏方中各功效组的配伍特点。首先利用中医药整合药理学研究平台(TCMIP v2.0)获得RA临床症状表型的相关基因集,再通过临床寒湿痹阻证RA患者和健康志愿者对照的转录组表达谱检测及生物信息挖掘,筛选获得RA寒湿痹阻证的差异表达基因集。同时,从TCMIP v2.0和中医药数据库(TCMBank)中,收集天和追风膏所含35味中药材的化学成分信息,并依据化合物结构相似性原理,预测其候选靶标谱。进一步,利用上述病证基因和药物候选靶标的相互作用信息,构建“RA寒湿痹阻证相关基因-天和追风膏候选靶标”互作网络,通过计算网络拓扑特征值,筛选其核心网络靶标,并基于Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes(KEGG)和Reactome Pathway Database(Reactome)通路数据库开展功能挖掘,进一步探索天和追风膏组方中各功效组的配伍机制。研究结果显示,天和追风膏候选靶标所参与的通路主要分布于“免疫-炎症”调节、神经系统功能、细胞功能、物质和能量代谢等模块,且膏方中不同功效组的作用特点各有侧重:祛风除湿-通经活络组、息风止痉组和辛辣止痛组通过散寒邪和温经脉,活血化瘀组和强筋健骨组通过畅血气和通经络,调节“免疫-炎症”系统;祛风除湿-通经活络组、活血化瘀组、强筋健骨组、息风止痉组和清热泻水组通过补气血和益神明影响神经系统;祛风除湿-通经活络组和息风止痉组通过祛风邪和除寒湿、活血化瘀组和强筋健骨组通过通血脉和强筋骨,调节细胞功能、物质和能量代谢。综上,天和追风膏可能通过矫正“免疫-炎症”失衡、调节神经系统和细胞功能,以及干预物质和能量代谢以发挥祛风除湿、活血化瘀、温经通络、强筋健骨的综合功效,并改善RA寒湿痹阻证症状。相关研究结果为明确天和追风膏的疗效特点和临床定位奠定基础。
2022年18期 v.47 4978-4986页 [查看摘要][在线阅读][下载 1094K] [引用频次:17 ] |[下载次数:1199 ] - 张贝贝;曾梦楠;张钦钦;王茹;贾菊芳;郭彭莉;刘萌;冯卫生;郑晓珂;
网络药理学结合体内实验探究“麻黄-葶苈子”药对治疗哮喘的作用机制,为临床用药提供理论依据。首先,利用网络药理学预测“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的潜在靶点,构建“中药-活性成分-靶点-通路-疾病”的关系网络,并对潜在靶点进行Gene Oncology (GO)功能分析和Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG)信号通路富集分析,分子对接模拟关键候选活性成分与核心基因的结合活性。然后,通过腹腔注射卵白蛋白(ovalbumin, OVA)致敏液和雾化激发构建OVA哮喘大鼠模型,分为正常组、模型组、地塞米松组(dexamethasone, DEX, 0.075 mg·kg~(-1))和“麻黄-葶苈子”药对组(MT,配伍比例1∶1.5),苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)和过碘酸雪夫(PAS)染色观察“麻黄-葶苈子”对哮喘大鼠肺脏和气管病理变化及杯状细胞增生情况的影响,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清中转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素6(IL6)和白细胞介素10(IL10)水平,进而通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot法检测网络药理学预测的核心基因丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、cyclin D1(CCND1)、表皮生长因子受体(EGFR)、IL6、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(Akt)的mRNA和蛋白表达水平。网络药理学分析表明“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的潜在核心基因为MAPK8、CCND1、IL6和EGFR,并且可能与PI3K/Akt信号通路相关,“麻黄-葶苈子”药对中活性成分槲皮素和β-谷甾醇作用于哮喘的靶点较多,且分子对接结果显示槲皮素和β-谷甾醇与MAPK、PI3K和Akt具有较好的结合活性;体内实验结果表明“麻黄-葶苈子”可有效改善OVA哮喘大鼠症状,改善肺部组织病理变化,减少杯状细胞产生,减轻哮喘大鼠炎症反应,抑制MAPK8、CCND1、EGFR和IL6的表达,调节PI3K/Akt信号通路。因此,推测“麻黄-葶苈子”可能通过调节PI3K/Akt信号通路改善大鼠哮喘症状,抑制哮喘大鼠炎症反应,槲皮素和β-谷甾醇可能是“麻黄-葶苈子”治疗哮喘的候选活性成分。
2022年18期 v.47 4996-5007页 [查看摘要][在线阅读][下载 1547K] [引用频次:29 ] |[下载次数:3224 ] - 梁霄;张筠昊;白皓天;李娅兰;孙淑慧;张倩倩;杨婧;王锐;
利用网络药理学、分子对接技术和体外细胞实验,研究乌药抗胃癌的主要活性成分和潜在作用机制。利用中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库、在线人类孟德尔遗传(OMIM)和GeneCards数据库提取乌药活性成分,并预测了乌药与胃癌有关靶点。筛选二者共同的潜在功能靶位之后,再利用STRING数据库实现与二者共同靶点的蛋白相互作用(PPI)网络构建。利用DAVID数据库进行GO和KEGG富集分析;以STRING和DAVID数据库为基础,运用Cytoscape 3.7.2软件构建“活性成分-靶点”网络和“活性成分-靶点-通路”网络;利用AutoDock Vina进行分子对接,预测有效成分与关键作用靶点的结合度,最后对关键靶点和通路进行体外实验验证。预测结果共获得乌药活性成分9个、相关靶点179个,乌药与胃癌的共同靶点107个,靶点共涉及生物过程693种,细胞组成57种,分子功能129种,参与肿瘤抗原p53、缺氧诱导因子1等信号通路161条;分子对接结果显示核心成分吉马酮与TP53有较高的结合活性。最后体外实验将筛选出的乌药活性成分吉马酮对人胃癌细胞SGC-7901进行核心靶点和通路的初步验证,结果表明吉马酮可明显抑制胃癌细胞增殖并通过调控p53、Bax、Bcl-2等关键蛋白的表达来诱导SGC-7901凋亡。综上所述,乌药通过多成分、多靶点、多通路协同作用控制胃癌的发生发展,为今后临床进一步探讨乌药治疗胃癌的机制提供理论依据。
2022年18期 v.47 5008-5021页 [查看摘要][在线阅读][下载 2049K] [引用频次:18 ] |[下载次数:1909 ] - 滕菲;李祥溦;李敏;范冬冬;朱晶晶;高慧敏;王智民;
该实验利用UPLC-Q-TOF-MS~E技术分析绞股蓝不同部位的皂苷成分,共鉴定46种皂苷成分,其中地下部位的皂苷种类比地上部位多26种,且多为三糖皂苷;利用高脂饲料建立大鼠高脂血症模型,研究绞股蓝地下部位总皂苷的降脂活性,为绞股蓝地下部位的综合利用提供理论依据。99只健康SD大鼠,随机分为空白组,模型组,阳性药组,地上总皂苷组,地下总皂苷低、中、高剂量组。除空白组外,其余各组均饲喂高脂饲料6周,根据血清总胆固醇(total cholesterol, TC)及血清甘油三酯(triglyceride, TG)水平判定造模是否成功。连续灌胃给药30 d后,观察状态,测定体质量、肝比重、TC、TG、血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、胆红素,总胆汁酸、肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、肝组织丙二醛(MDA)、过氧化物酶增殖物激活受体(PPAR-γ),HE染色观察肝脏病理变化情况。从结果看,地上部位总皂苷、地下部位总皂苷中、高剂量连续给药可治疗肝细胞脂肪变性,降低模型大鼠血清中TC、TG、LDL-C、ALT、AST、总胆红素、MDA、PPAR-γ水平,升高HDL-C、SOD水平,且随着给药剂量增大,趋势更加明显。因此,地下部位的绞股蓝总皂苷具有良好的降低血脂的药理作用,这为绞股蓝地下部位的综合利用提供了理论依据。
2022年18期 v.47 5022-5031页 [查看摘要][在线阅读][下载 1023K] [引用频次:25 ] |[下载次数:1390 ] - 陆颖颖;黄枭;罗子宸;祁明媛;单进军;张雯;狄留庆;
采用血清非靶向代谢组学技术研究蛹虫草抗非小细胞肺癌药效作用的潜在机制。以Balb/c裸鼠构建人肺癌荷瘤裸鼠移植瘤模型,比较模型组与顺铂组,冬虫夏草低、中、高剂量组,蛹虫草低、中、高剂量组中移植瘤裸鼠的肿瘤体积、肿瘤质量及抑瘤率,以评价蛹虫草对肺癌生长的影响。收集移植瘤裸鼠血清样本,使用气相色谱-质谱(gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS)仪器进行检测,运用SIMCA 13.0软件开展血清代谢轮廓比较,采用MetaboAnalyst 5.0探究相关代谢通路。药效学数据表明,与模型组相比,蛹虫草高剂量组和顺铂组裸鼠的肿瘤体积与肿瘤组织质量显著减小(P<0.05或P<0.01)。代谢组学结果显示,蛹虫草组与模型组裸鼠血清的代谢轮廓具有明显差异,其内源性代谢物含量受不同程度的调整,初步鉴定出42个差异代谢物及7条代谢通路。综上,蛹虫草能够显著抑制人肺癌移植瘤裸鼠肿瘤的生长,其潜在作用机制可能与影响氨酰-tRNA合成,谷氨酰胺和谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢,乙醛酸和二羧酸代谢,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,精氨酸生物合成及氮代谢等通路密切相关。该研究从代谢物角度阐释了蛹虫草抗非小细胞肺癌的作用机制,为蛹虫草抗肿瘤研究及临床应用奠定基础。
2022年18期 v.47 5032-5039页 [查看摘要][在线阅读][下载 773K] [引用频次:5 ] |[下载次数:1022 ] - 陆苑;王艳丽;宋忠军;朱晓青;刘春花;陈际宇;李勇军;何艳;
该研究基于高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱联用仪探究银杏黄酮苷元(ginkgo flavone aglycone, GA)联合阿霉素(doxorubicin, DOX)对H22肝癌细胞的抑制作用及作用机制。首先考察不同浓度GA和DOX对H22细胞存活率的影响,以组合指数(combination index, CI)对两者的联合用药进行评价。将实验分为对照组(CON)、DOX组、GA组、联合用药组(GDOX),通过代谢组学策略探寻联合用药较单独用药后显著改变的代谢标志物,分析可能的代谢通路和作用机制。结果显示,以30μg·mL~(-1) GA与0.5μmol·L~(-1) DOX作为联合给药浓度,CI为0.808,表明两者联合发挥协同抗肿瘤作用。代谢组学分析鉴定出L-精氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸等23种代谢标志物,以氨基酸类物质为主。与CON组相比,DOX治疗后22种代谢标志物被显著下调,GA治疗后17种代谢标志物被显著下调。相较于DOX和GA组,GDOX联合用药进一步下调了这些代谢标志物在肝癌中的水平,这可能是两者联合起到增效作用的原因。通路富集分析中找到5条关键代谢通路,包括谷胱甘肽代谢,苯丙氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,β-丙氨酸代谢,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解。这表明GA联合DOX的协同抗肿瘤作用,可能是通过干预多种氨基酸的代谢,进而影响肿瘤细胞的能量供应实现。
2022年18期 v.47 5040-5051页 [查看摘要][在线阅读][下载 1152K] [引用频次:8 ] |[下载次数:1272 ] - 陈旭;黄志芳;刘云华;刘玉红;陈燕;秦登云;易进海;
丹葛酚酮胶囊是基于丹参葛根对药,以丹参酚酸、丹参酮和葛根黄酮为药物成分,治疗糖尿病周围神经病变的组分中药新药。探究丹葛酚酮胶囊体内化学成分及代谢产物,对阐明药物药效物质基础及作用机制具有重要意义。该研究利用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q/Orbitrap-MS/MS),以Eclipse plus C_(18)(2.1 mm×50 mm, 1.8μm)为色谱柱,0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱,采用加热电喷雾离子源(HESI),扫描方式为正、负离子模式,质量扫描范围m/z 100~1 000,快速分析Beagle犬灌胃丹葛酚酮胶囊后体内代谢产物和生物转化途径。以雄性Beagle犬为实验对象,灌胃丹葛酚酮胶囊,收集血浆、尿液、粪便样品,采用高分辨质谱结合对照品和文献分析鉴定体内原型成分和代谢产物。结果显示,共鉴定出107个化学成分,丹葛酚酮胶囊原型成分58个,包括42个丹参成分和16个葛根成分,代谢产物49个,包括21个丹参代谢产物和28个葛根代谢产物。代谢产物主要来自丹参酚酸类、丹参酮类和葛根黄酮类成分甲基化、羟基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化等。该实验快速分析灌胃丹葛酚酮胶囊后Beagle犬体内化学成分,为进一步阐明丹葛酚酮胶囊药效物质基础及作用机制提供参考。
2022年18期 v.47 5052-5063页 [查看摘要][在线阅读][下载 793K] [引用频次:8 ] |[下载次数:1242 ]