- 谢光璟;徐波;夏婧;徐子绚;李非洲;王平;
探讨安寐丹对睡眠剥夺大鼠海马神经元及突触微环境的影响。60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、安寐丹组和褪黑素组，每组15只。采用多平台水环境法制备睡眠剥夺模型，安寐丹组给药剂量为18.18 g·kg~(-1)·d~(-1),褪黑素组给药剂量为100 mg·kg~(-1)·d~(-1),空白组和模型组给予等容纯水，大鼠灌胃给药，时间为4周。动物行为视频系统评估大鼠自发活动变化，尼氏染色观察海马锥体神经元及尼氏体变化，原位末端转移酶标记技术观察神经元凋亡，透射电镜观察神经元突触超微结构，高尔基染色观察海马树突棘变化，免疫荧光检测海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)与γ-氨基丁酸A受体(GABAA)、谷氨酸受体N1(GLUN1)表达及突触后致密蛋白95(PSD95)、突触素(SYP)、脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)的表达，蛋白免疫印迹法检测神经调节素1(NRG1)、酪氨酸激酶受体4(ErbB4)和谷氨酸受体A1(GLUA1)、GLUN1及谷氨酸受体N2A(GLUN2A)的表达。结果显示，与空白组比较，模型组水平得分、垂直得分及修饰次数、中央区路程比例显著降低，海马锥体细胞数量减少，尼氏体减少，凋亡指数增加，NRG1、ErbB4及GLUA1、GLUN1、GLUN2A蛋白表达下调，GFAP~+/GABAA~+及GFAP~+/GLUN1~+阳性表达下降，PSD95、SYP及BDNF、NGF荧光强度下降，同时突触囊泡密度不均，突触界面曲率及突触后致密物质厚度降低，树突棘减少。与模型组比较，安寐丹组水平得分、垂直得分及修饰次数、中央区路程比例升高，海马锥体细胞及尼氏体增加，凋亡指数下降，NRG1、ErbB4、GLUA1、GLUN1、GLUN2A蛋白表达上调，GFAP~+/GABAA~+及GFAP~+/GLUN1~+阳性表达增加，PSD95、SYP及BDNF、NGF荧光强度升高，且突触损伤减轻，树突棘增加。研究结果表明，安寐丹缓解睡眠剥夺大鼠海马神经元损伤可能与上调NRG1/ErbB4信号通路，促进谷氨酸受体、神经营养因子、突触蛋白表达，改善突触微环境有关。
2024年18期 v.49 4957-4966页 [查看摘要][在线阅读][下载 3104K] [引用频次：4 ] |[下载次数：849 ] - 吴李征;陈晓鑫;孙博文;裴芳利;蓝丹彤;邝梓君;张诗媛;曾诚;
观察罗氏内异方对子宫内膜异位症(EMs)中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和类固醇生成因子1(SF-1)的影响，探索罗氏内异方对EMs的治疗机制。免疫组化及qPCR法检测临床EMs组织中HIF-1α和SF-1的表达。提取鉴定人原代子宫内膜间质细胞(ESCs),免疫荧光及qPCR法检测HIF-1α和SF-1的表达。用氯化钴(CoCl_2)模拟体外缺氧环境，构建HIF-1α敲低慢病毒，qPCR或蛋白免疫印迹检测HIF-1α或SF-1的表达。观察罗氏内异方含药血清对缺氧环境下在位ESCs增殖、迁移、雌激素(E_2)、HIF-1α和SF-1的影响。采用自体子宫内膜移植法联合多因素干预法建立气滞血瘀证EMs大鼠模型，观察罗氏内异方对大鼠异位子宫内膜组织中HIF-1α和SF-1的影响。结果提示，与正常子宫内膜组织及间质细胞相比，异位内膜组织及间质细胞中HIF-1α和SF-1的蛋白和mRNA水平均升高。与对照组相比，50μmol·L~(-1) CoCl_2处理在位ESCs 24 h可促进细胞增殖，显著增加HIF-1α mRNA和SF-1蛋白表达，而敲低HIF-1α可显著减少SF-1和E_2表达。与模型组相比，罗氏内异方含药血清组在位ESCs的增殖及迁移能力下降，E_2、HIF-1α和SF-1表达下降。同样，EMs大鼠经罗氏内异方治疗后，异位内膜组织病理损伤减轻，HIF-1α、SF-1的表达水平也显著降低。综上，罗氏内异方对EMs的治疗作用可能与改善缺氧环境，抑制HIF-1α/SF-1轴有关。
2024年18期 v.49 4967-4976页 [查看摘要][在线阅读][下载 2919K] [引用频次：1 ] |[下载次数：453 ] - 刘梦雅;梁永林;成映霞;段永强;白敏;袁晓梅;刘自由;公艳霞;
基于转录组学技术探讨香砂六君子汤治疗慢性萎缩性胃炎(CAG)的分子机制并进行实验验证。通过1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)复合多因素法建立CAG大鼠模型，香砂六君子汤干预90 d。测定各组大鼠体质量和3 h进食量，采用HE染色观察各组大鼠胃组织病理改变，采用转录组学测序技术(RNA-Seq)测定各组大鼠胃组织中基因表达，对差异基因进行KEGG富集分析并对富集到的关键信号通路进行验证。结果显示，与空白组相比，模型组大鼠体质量、3 h进食量显著降低，胃组织表现典型的萎缩之征；与模型组相比，给药组大鼠体质量、3 h进食量显著增加，胃组织病理损伤均得到明显改善。RNA-Seq测序共获得香砂六君子汤改善CAG的相关基因944个，KEGG富集分析发现这些基因主要富集于多种涉及炎症、增殖、凋亡的信号转导途径以及环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)/蛋白激酶G(PKG)通路。与空白组比较，模型组胃组织中腺苷A1受体(Adora1)、钙激活钾通道蛋白β2(Kcnmb2)mRNA表达显著升高，B型内皮素受体(Ednrb)、人Rho关联含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)、cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(Prkg2)、环腺苷酸应答元件结合蛋白H抗体(Creb3l3)mRNA表达显著降低；与模型组比较，给药组胃组织中Adora1、Kcnmb2 mRNA表达显著降低，Ednrb、Rock2、Prkg2、Creb3l3 mRNA表达显著升高。与空白组比较，模型组胃组织和血浆中cAMP含量以及胃组织中Ras同源基因家族成员A(RhoA)、ROCK2、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶标亚基1(p-MYPT1)、磷酸化肌球蛋白轻链20(p-MLC20)蛋白表达均显著降低，胃组织和血浆中cGMP含量以及胃组织中PKG蛋白表达显著升高；与模型组比较，给药组胃组织和血浆中cGMP含量以及胃组织中PKG蛋白表达显著降低，胃组织中RhoA、ROCK2、p-MYPT1、p-MLC20蛋白表达显著升高。同时RT-qPCR结果表明cGMP/PKG通路关键基因的表达与RNA-Seq结果基本一致。综上所述，香砂六君子汤对CAG大鼠具有显著的治疗作用，其具体机制可能与调控cGMP/PKG通路及下游相关信号分子的异常表达相关。
2024年18期 v.49 4977-4985页 [查看摘要][在线阅读][下载 1921K] [引用频次：0 ] |[下载次数：907 ] - 徐志伟;周小杰;黄筠皓;姬丽婷;李昌煜;
探讨石菖蒲挥发油对小胶质细胞焦亡的影响及其作用机制。采用1μg·mL~(-1)脂多糖和10μmol·L~(-1)尼日利亚菌素钠盐制备BV-2细胞焦亡模型，给予不同剂量的石菖蒲挥发油干预，CCK-8法检测细胞存活率；流式细胞术检测细胞凋亡情况；ELISA法检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)含量；qRT-PCR检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)mRNA水平；免疫荧光法检测离子钙结合衔接分子1(Iba-1)、NLRP3蛋白表达；Western blot检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Iba-1、κB抑制因子激酶β(IKKβ)、p-IKKβ(Y188)、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB(S536)、NLRP3、ASC、caspase-1、cleaved caspase-1、焦孔素D(GSDMD)和GSDMD-N蛋白表达。结果显示，8、16、32μg·mL~(-1)石菖蒲挥发油能明显改善脂多糖和尼日利亚菌素钠盐诱导的细胞存活率降低现象，增加Bcl-2/Bax比值，改善细胞凋亡情况；降低Iba-1蛋白表达；减少TNF-α、IL-1β和IL-18炎症因子含量；降低NLRP3、ASC和caspase-1 mRNA水平以及NLRP3、ASC、caspase-1、p-IKKβ(Y188)/IKKβ、p-NF-κB (S536)/NF-κB p65、cleaved caspase-1和GSDMD-N蛋白表达。结果表明，石菖蒲挥发油能够抑制NLRP3炎症体介导的小胶质细胞焦亡。
2024年18期 v.49 4986-4995页 [查看摘要][在线阅读][下载 2443K] [引用频次：1 ] |[下载次数：1052 ] - 王海娟;李君翔;梁一博;杨平荣;张春江;
该研究采用植物乳杆菌发酵纹党参，探讨纹党参发酵液(FCR)对急性胃溃疡大鼠胃黏膜的保护作用机制。将64只SD大鼠随机分成8组：空白对照组、模型组、阳性对照组(奥美拉唑)、益生菌组、纹党参未发酵组及FCR低、中、高剂量组，每组8只。采用无水乙醇法对大鼠进行灌胃致急性胃溃疡损伤模型。观察胃黏膜组织的形态学和病理学组织变化，检测各组大鼠胃溃疡面积、抑制率、胃组织抗氧化能力、血清炎症因子及胃黏膜保护因子的表达，测定胃溃疡损伤大鼠肠道菌群的变化情况。结果显示FCR能明显改善胃黏膜组织损伤情况，降低溃疡指数，提高溃疡抑制率，提高大鼠胃组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、一氧化氮(NO)及胃黏膜保护因子血清前列腺素E2(PGE2)的活性，降低丙二醛(MDA)的含量。与模型组比较，FCR降低了大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及髓过氧化物酶(MPO)的活性，此外，无水乙醇损伤大鼠肠道菌群，给予FCR后有效调节了肠道菌群，使得拟杆菌门的相对丰度增加，粪异杆菌属相对丰度减少。即FCR可通过调节抗氧化应激能力、抗炎活性、胃黏膜保护因子的表达及肠道菌群的失衡，从而增强对大鼠急性胃溃疡的保护作用。
2024年18期 v.49 4996-5005页 [查看摘要][在线阅读][下载 2822K] [引用频次：0 ] |[下载次数：1008 ] - 边雨婷;张艳珍;陶庆文;干畅;韩雨欣;鄢泽然;王金平;王建明;胡春宇;
探究尪痹片(Wangbi Tablets, WBT)通过调控cGAS-STING信号通路改善肾虚证胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)大鼠炎症水平的作用机制。24只SPF级SD大鼠，随机选取18只构建肾虚证CIA模型，共分为4组，每组6只，分别为空白对照组(control组)、肾虚证CIA组(model组)、肾虚证CIA+WBT组(M+WBT组)、肾虚证CIA+甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)组(M+MTX组)。评估各组肾虚证和关节炎评分；酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清白细胞介素-18(IL-18)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平；苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色、番红-固绿染色观察踝关节、滑膜及软骨的病理变化情况；免疫组化(immunohistochemistry, IHC)检测踝关节骨组织内DNA聚合酶β(polymerase beta, Polβ)、环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)的表达水平；蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Polβ、cGAS、干扰素刺激因子(STING)、磷酸化STING(p-STING)、核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)、磷酸化NF-κB (phospho-NF-κB, p-NF-κB)、干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3, IRF3)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、GSDMD蛋白N端(GSDMD-NT)、半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达水平；TUNEL染色检测踝关节骨组织细胞凋亡率。结果显示，与control组相比，model组肾虚和关节炎症状和体征变化最严重，经WBT干预后关节变形、精神状态、毛色有一定程度改善；与model组相比，WBT能够显著改善肾虚和关节炎症状。与control组相比，model组血清IL-18、IL-1β水平升高；与model组相比，M+WBT组IL-18水平显著降低，IL-1β有降低趋势。与control组相比，model组踝关节骨组织内可见大量炎细胞浸润伴结构破坏，软骨基质已破坏，WBT能够减轻model组大鼠踝关节骨组织的炎症、骨与软骨破坏。与control组相比，model组cGAS、IRF3、p-NF-κB/NF-κB、caspase-1、cleaved-caspase-1水平显著升高，p-STING/STING、GSDMD、GSDMD-NT升高；与model组相比，WBT干预后的model组大鼠踝关节骨组织中Polβ表达显著增强，cGAS、IRF3、GSDMD、GSDMD-NT、caspase-1表达水平显著降低，p-STING/STING、p-NF-κB/NF-κB、cleaved-caspase-1有降低趋势。与control组比，model组骨组织内、滑膜、新生血管内皮处细胞凋亡显著降低，WBT的干预能够增加滑膜等处的细胞凋亡。综上得出，WBT对肾虚证CIA大鼠有治疗作用，其机制体现在显著提高踝关节骨组织的Polβ的表达水平，抑制cGAS-STING信号通路，降低焦亡标志蛋白的表达，减少细胞因子的释放，从而减轻炎症反应，延缓骨破坏的进展，发挥防治RA的作用。
2024年18期 v.49 5006-5015页 [查看摘要][在线阅读][下载 1850K] [引用频次：3 ] |[下载次数：999 ] - 要莹莹;樊飞燕;李少康;施艾每;杨俊红;张运克;
探讨芪芎左归复方干预骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells, BMSCs)外泌体对衰老大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)大鼠血脑屏障(blood-brain barrier, BBB)的修复作用及抗衰老的作用机制。采用D-半乳糖致衰老法联合线栓法建立衰老MCAO复合模型，实验设青年假手术组、衰老假手术组、模型组、外泌体组、中药干预的外泌体组，使用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色联合TTC染色评估模型的建立情况，术后2 h及脑缺血再灌注后48、96 h外泌体组及中药干预的外泌体组分别于尾静脉注射相应的外泌体。造模成功后2 h、3 d、7 d进行神经功能缺损评分；第7天通过新物体识别实验检测认知功能、磁共振观察脑梗死体积；伊文思蓝染色评价BBB通透性；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脑组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-2水平；SA-β-gal染色检测衰老细胞情况；反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测p21 mRNA的表达，实时荧光定量PCR(qPCR)检测端粒相对长度。结果显示，芪芎左归复方干预BMSCs外泌体能显著降低衰老MCAO大鼠脑梗死体积，改善神经功能缺损评分，提高认知功能；并能抑制MMP-2、MMP-9表达，促进紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达，降低BBB的通透性；同时还能降低p21 mRNA的表达，延长端粒长度，延缓细胞衰老。综上，芪芎左归复方干预BMSCs外泌体可能通过降低MMP-2、MMP-9含量，提高ZO-1、Occludin表达水平来修复BBB,同时其抗衰老机制可能与降低p21 mRNA的表达、限制端粒缩短有关。
2024年18期 v.49 5016-5024页 [查看摘要][在线阅读][下载 1638K] [引用频次：0 ] |[下载次数：1412 ]